
จากอดีตเจ้าหน้าที่รักษาความปลอดภัยกะกลางคืนของพิพิธภัณฑ์ประวัติศาสตร์แห่งชาติ เวลานี้ แลร์รี่ เดลี่ย์.(เบน สติลเลอร์).กลายเป็นนักธุรกิจที่ประสบความสำเร็จอย่างสวยงาม แต่ไม่นานหลังทราบข่าวว่าบรรดาสหายเก่าจากพิพิธภัณฑ์ที่เขาเคยทำงานถูกย้ายมาอยู่ที่สถาบันสมิธโซเนี่ยน แลร์รี่ก็ได้รับโทรศัพท์ทางไกลจากเจดีดิอาห์.(โอเว่น วิลสัน).มาเตือนว่าสี่จอมวายร้ายที่ยิ่งใหญ่ที่สุดในประวัติศาสตร์โลกได้มีชีวิตขึ้นมาและ.กำลังก่อแผนยึดสมิธโซเนี่ยน ก่อนที่จะยึดโลกเป็นเป้าหมายต่อไป แลร์รี่จึงต้องกลับมาร่วมมือกับเพื่อนรักทั้งเก่าและ.ใหม่เพื่อทำลายแผนร้ายของจอมแสบทั้งสี่ให้จงได้
สามปีหลังจากเหตุการณ์ในภาพยนตร์เรื่องแรกแลร์รี เดลีย์ ยามกลางคืนที่พิพิธภัณฑ์ประวัติศาสตร์ธรรมชาติอเมริกัน ได้บริหารบริษัท โทรทัศน์ตอบสนองโดยตรงของเขาเองซึ่งขายสิ่งประดิษฐ์จากประสบการณ์ในพิพิธภัณฑ์ของเขา วันหนึ่งเขาแวะที่พิพิธภัณฑ์ ดร. McPhee กล่าวว่าการจัดแสดงส่วนใหญ่จะถูกย้ายไปที่ Federal Archives ที่สถาบัน Smithsonian Institutionโดยถูกแทนที่ด้วยผู้ให้บริการข้อมูลโฮโลแกรม ลาร์รีใช้เวลาหนึ่งคืนสุดท้ายกับเพื่อนๆ ที่จัดแสดงของเขา ไม่นานก่อนรุ่งสางTeddy Rooseveltบอก Larry ว่า Tablet of Ahkmenrah จะคงอยู่ในฐานะหนึ่งในนิทรรศการดั้งเดิมเพียงแห่งเดียวในพิพิธภัณฑ์ พร้อมด้วย Teddy, Rexyและอัคเมนราห์เอง การจัดแสดงอื่น ๆ ทั้งหมดที่ไปที่ Smithsonian (รวมถึงHuns , Neanderthals , miniatures, SacagaweaและDexter ) จะสูญเสียความสามารถในการมีชีวิตในเวลากลางคืน หลังจากย้ายนิทรรศการในวันรุ่งขึ้น ลาร์รีก็ได้รับโทรศัพท์จากเจเดไดอาห์อย่างน่าประหลาดใจ ซึ่งแจ้งเขาว่าเด็กซ์เตอร์ลิงขโมยแท็บเล็ตและนำไปที่สถาบันสมิธโซเนียน เพื่อทำให้การจัดแสดงที่นั่นมีชีวิตชีวาเช่นกัน เมื่อได้ยินเสียงการต่อสู้และความโกลาหลเมื่อมีคนดึงเจดออกจากโทรศัพท์ แลร์รี่จึงเดินทางไปยังกรุงวอชิงตัน ดี.ซี.และนำทางไปยังหอจดหมายเหตุขณะสวมบทบาทเป็นยามราตรี ด้วยความช่วยเหลือจากภายนอกจากนิค ลูกชายของเขา
แลร์รี่พบว่าเพื่อนๆ ของเขาติดอยู่ในตู้สินค้าในขณะที่ยังถูกโจมตีจากกองทัพของคาห์มุนเราะห์ พี่ชายที่ชั่วร้ายของอาคเมนราห์ แลร์รี่พยายามงัดแท็บเล็ตออกจากมือเด็กซ์เตอร์ แต่เมื่อเขาได้รับ พระอาทิตย์ก็ตกดิน แท็บเล็ตเริ่มทำงาน และการจัดแสดงในพิพิธภัณฑ์สมิธโซเนียนก็กลับมามีชีวิตอีกครั้ง Kahmunrah ขังเพื่อนของ Larry ไว้ในตู้คอนเทนเนอร์และเปิดเผยแผนการของเขาที่จะใช้พลังของแท็บเล็ตเพื่อพิชิตโลก อย่างไรก็ตาม ลาร์รีหลบหนีได้ด้วยความช่วยเหลือของปลาหมึกยักษ์และหุ่นขี้ผึ้งของนายพลจอร์จ เอ. คัสเตอร์แม้ว่าตัวหลังจะถูกจับและขังไว้กับเพื่อนของลาร์รี
Night At The Museum Battle Of The Smithsonian ไนท์ แอท เดอะ มิวเซียม มหึมาพิพิธภัณฑ์ ดับเบิ้ลมันส์ทะลุโลก (2009)